1.设计克隆引物,根据载体图谱（一般的载体都行,如pMD18或19）选择合适的酶切位点
2.PCR扩增该全长CDS序列（用高保真酶）
3.跑胶后切胶回收质粒,并测定浓度（一般不低于10ng/ul,浓度高转化效率高）
4.加A尾（是否加尾依酶而定）,4℃连接过夜（可变）
5.大肠杆菌感受态细胞转化涂板37℃过夜（~12h）
6.挑单菌落做菌落PCR验证,另外取P出来的分别37℃摇菌培养过夜
7.提质粒,进行酶切验证,选一或两个阳性的单克隆送公司测序
8.测序结果完全正确后,表达载体构建成功
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