蛋白质盐析过程中应注意什么
3个回答
盐析：当盐浓度增高到一定值时,蛋白质的溶解度逐渐下降,直至蛋白质析出.
1) 盐的选择
蛋白质沉淀时,常用（NH4)2SO4
优点：溶解度大,且对温度不敏感；分级效果好；有稳定蛋白质结构的作用；价廉,废液可作肥料.
缺点：沉淀后样品需脱盐.
2) （NH4)2SO4盐析
固体法：搅拌下,少量多次加入
饱和溶液法:在蛋白质溶液中加入预先调好pH的（NH4)2SO4溶液.
透析法:将盛蛋白质溶液的透析袋放入一定浓度的（NH4)2SO4溶液中,通过透析作用改变蛋白质溶液中的盐浓度.使用于小体积样品.
影响盐析的因素:
A、盐析常数Ks的影响：
Cohn方程式：lgS=β－Ks×M
Ks：盐析常数,与T、pH有关,与蛋白质及盐的种类有关
Ks越大－－△S变化大－－盐析效果好
B、pH的影响
C、蛋白质纯度和浓度的影响
D、其他因素的影响：
金属离子：加EDTA－Na2溶液
脱盐:
透析方法：
搅拌下,3hr平衡,样品液：透析液＝1:10；
或静止,过夜,样品液：透析液＝1:20.
检查：脱（NH4)2SO4 ：用10%BaCl2检查
脱NaCl ：用10%AgNO3检查
