Mmmmmm,这个问题啊,从你的描述确实是模板的问题了,导致PCR失败的模板问题无非两种：浓度和纯度,LS的兄弟说的不错,模板浓度太大不行,稀释做个梯度看看也许管用；另一方面,纯度的控制就没这么简单了,从土壤中提取的基因组中包括肯定不止一种微生物的DNA,对任何一种微生物DNA来说,其他微生物的DNA都算是杂质而且无法去除,同时氛氯仿法提取的DNA通常纯度不会太高,尤其你的介质又是土壤,难免有其他杂质除不干净,建议你用试剂盒纯化一下你的模板,我常用的纯化基因组的试剂盒是OMEga的PCR产物纯化试剂盒,其实对模板进行稀释,也就是对杂质进行稀释,以期达到一种平衡,使得模板能够作用而杂质不起作用,另：我不是做广告的
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