引物的设计一般要考虑以下几个问题：
1.长度,至少要16bp,通常为18-30bp
2.解链温度（Tm值）
3.避免引物内部或引物之间存在互补序列（3个碱基）,从而减少引物二聚体的形成以及引物内部二级结构的形成
4.G+C含量尽量控制在40%-60%之间.4钟碱基的分布应尽可能均匀.尽量避免嘌呤或嘧啶的连续排列,以及T在3'末端的重复排列
5.引物的3'末端最好是G或C,但不要GC连排
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