首先要确定引物是否降解了,pcr常用的引物都是10p浓度的,如果四度放久了会降解,既然以前能做出来,那么很可能是引物降解了,而且你的阳性对照是有条带的说明PCR的体系和条件是没问题的,所以推测引物出问题了,重新稀释一些引物再试试吧,PCR条件也可以变变,做个touchdown试试,
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