为什么PCR跑不出来,都弥散了
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“从头拖到尾,另外一对引物就能做出来”

说明不是引物之间形成二聚体,而是第一对引物的设计有问题(特异性很差).如果一定要扩增那个区,建议引物的位置向两边放一放.如果你没有好的设计软件,建议到Primer3去试试(目前最好的免费引物设计).

如果还是不行,把序列发给我,我帮你设计(我有专业软件,ABI primer express 3 和 Invitrogen Vector NTI 10)