引物是PCR反应中非常重要的一环,我认为引物对PCR的影响主要体现在2方面:
1,影响PCR的特异性,也就是说,所扩增的片段能否是你想要的特异性目的片段,而不是非特异性杂带,一般来说,引物与模板序列匹配的越多,其特异性越好,但引物并不是越长越好,其原因就是下一个方面;
2,影响PCR的效率,在退火环节中,引物越长,退火的反应就越慢,过长时就会阻碍PCR反应的顺利进行,而引物短,则能更快的使引物与模板结合,但其特异性就下降,有可能会出现“乱搭”的情况;
除此之外,引物的GC含量以及引物二聚体的存在,也会影响PCR反应,但我认为主要的还是上述2方面(因为如果不考虑酶切位点的情况,往往目的片段已定时,引物序列能调整的主要就是其长度),所以需要根据模板的情况和目的片段特点,选择合适长度和起始的引物,对PCR的顺利进行是很有帮助的.
如有疑问,欢迎继续讨论,纯属手打,欢迎采纳,祝愉快!
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