通过使用U6含有启动子的PCR模板，固定的正向引物（U6-FWD），sgRNAencoding的DNA可以被附加到U6的反向引物（U6-转）合成为一个扩展的DNA寡核苷酸（从IDT Ultramer寡核苷酸）。需要注意的是在U6-冯引物，设计了针对从顶部链（蓝色）的一例目标导向序列，是20-bp的靶序列的反向互补前述的5'-NGG PAM。一个附加的胞嘧啶（“C”中灰色矩形）被附加在反向引物直接3...
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