什么是BAC 末端测序?有关DNA测序的方面
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BAC是细菌人工染色体意思,之所以有BAC文库的出现,是因为基因组序列太长,测序,以及筛选基因等没有办法完成,所以将基因组片段随机打断成片段,连到载体上构建成一系列的重组子,这样当你需要特定的序列,只需要筛选出自己要的那个bac重组子就行了.说的有点过于简单,不知道你能明白否?末端测序也是采用的双脱氧终止法的.双脱氧终止法的原理是；碱基之间是通过俩个碱基的5‘磷酸基团和3’羟基连接的,双脱氧终止法就是利用了这个3‘羟基,将3’羟基脱氧变成氢键,那么这样下一个碱基的5‘磷酸基团就没有办法连到前一个碱基上了.所以如果在做测序pcr的时候加一部分正常的dNTP(3号位为羟基),加一定量的ddNTP(2,3号位都是氢键),那么在第一个碱基后如果接上去的是dNTP,那么就可以接着连第三个碱基,如果连得是ddNTP,那么就没有办法连下个碱基形成链终止,在测序pcr中,数以万计的反应,那么就会出现2个碱基后终止的链,也有可能出现3个,4个,N个碱基后终止的链,这样就形成了一系列从一个碱基到N个碱基的序列（其最后一个碱基都是三号位为氢键的,这个应该理解吧）.那么如果我们在连上去的ddNTP上连上个荧光基团(四种ddNTP连上不同的荧光基团),那么将这一系列长度的链跑胶,会形成一系列的带,通过每条带最后一个碱基的荧光通过机器就能够区分是什么碱基,将这些碱基拼接好后就是你要的序列了.
