从ATP分子中含有两个高能磷酸键,当在酶作用下水解时,远离腺苷A也就是γ-P的那个高能磷酸键断裂,形成ADP和Pi（磷酸）,并将其蕴藏的能量释放出来.该键在一定条件下很容易断裂或重新形成,从而保证了能量的释放与储存.所以32P放射活性会出现在Pi中.
而靠近A的高能磷酸键（β-P）不易断裂和重新组合,不能参与能量代谢.所以[β-32P]-ATP在同样的时间内,32P的放射活性不出现在Pi中.
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