什么是反向点杂交
1个回答
核酸杂交技术根据检测目的和检测手段的不同,可分为液相杂交、固相杂交及细胞内定位(原位)杂交.固相杂交又可分为斑点杂交、凝胶电泳印迹转移杂交.而 反向斑点杂交(reverrsedotblot,RDB)是Saiki等提出的一种斑点杂交技术,该技术较正向斑点杂交和凝胶电泳印迹转移杂交具有快速、简便、高敏感性、特意性强的特点,尤其是基因分型、基因突变检测,病原体的检测等方面有其独特的优势.反向斑点杂交利用生物素等标记的探针和特意性扩增PCR产物(靶DNA序列)杂交.但是不同于一般的斑点杂交.一般的点印迹杂交是靶DNA固定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上,标记的探针和靶DNA杂交显色.这种方法每次杂交反映只能判断待测DNA是否含有某一种探针的同源序列,对于某些基因座位可能含有十几至几十个等位基因(如HLADRB位点或地中海贫血突变基因等),用这种点杂交方法就会很繁杂,甚至可能做不到.而RDB正是解决了这一难题.RDB是先将待用的探针分别点到硝酸纤维素膜或尼龙膜上,每个探针一个点并编上号,再将待测的DNA样本(一般是经PCR特意性扩增的产物,在PCR引物5’端预先进行生物素标记,使扩增产物相应标记有生物素)与之杂交,这样待检样本就会与具有同源序列的探针结合,经洗涤去除未结合的DNA样本,由于待测的DNA样本具有生物素类的标记物,结合了待测DNA的探针点上就带有生物素类的标记物,再经相应的显色反应就能显出杂交信号.这样一次就可以判断某一基因座位的大部分或全部等位基因,因此利用这样的工作原理还可以用于基因分型、病原体检测、肿瘤研究等.
