说影响得看情况,退火温度太高肯定会影响引物的结合效率的.但是,实际上,好的引物一般是上下游引物的退火温度比较接近.有时候,我们可能会通过牺牲特异性的手段(当GC含量过高时,减少引物长度)来平衡两条引物的退火温度.
高的退火温度是不利于复性的,所以不会因为使模板复性而降低扩增效率,倒是可能因为影响引物结合而降低扩增效率.不过65度应该没什么问题.我还是觉得两条引物退火温度一致最重要!
说影响得看情况,退火温度太高肯定会影响引物的结合效率的.但是,实际上,好的引物一般是上下游引物的退火温度比较接近.有时候,我们可能会通过牺牲特异性的手段(当GC含量过高时,减少引物长度)来平衡两条引物的退火温度.
高的退火温度是不利于复性的,所以不会因为使模板复性而降低扩增效率,倒是可能因为影响引物结合而降低扩增效率.不过65度应该没什么问题.我还是觉得两条引物退火温度一致最重要!
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