解题思路:基因拼接技术一般要经过四个步骤:一是获取目的基因,二是目的基因与运载体结合,三是将目的基因导入受体细胞,四是目的基因的检测与表达.
获得目的基因的方法:①从基因文库中获取 ②利用PCR技术扩增 ③人工合成(化学合成).人工合成目的基因有两种方法:一是通过mRNA→单链DNA→双链DNA;二是根据蛋白质氨基酸序列→mRNA序列→推测出结构基因核苷酸序列→通过化学方法人工合成.
(1)目的基因的获取主要有两种途径,一是从供体细胞的DNA中直接分离基因,二是人工合成基因.人工合成的方法之一有反转录法,即以目的基因转录的mRNA为模板,逆转录成互补的单链DNA,然后在酶的作用下合成双链DNA(目的基因).
(2)由于真核生物基因中有不表达的核苷酸序列(内含子),所以要想真核生物的基因在原核细胞中表达,就必须除去目的基因中的内含子.
(3)由于同种限制酶切割形成的粘性末端相同,因此目的基因和运载体上具有相同的粘性末端.当把切割后的运载体与目的基因放在一起,并加入DNA连接酶,将会出现3种环状的DNA分子,即运载体自连的、目的基因片段自连的、运载体与目的基因片段相连的环状DNA分子.
故答案为:
(1)信使RNA(mRNA)逆转录(反转录)双链DNA(目的基因)
(2)动植物细胞除去内含子
(3)3运载体自连的、目的基因片段自连的、运载体与目的基因片段相连的环状DNA分子
点评:
本题考点: 基因工程的原理及技术.
考点点评: 本题考查了基因工程的相关知识,意在考查考生的识记能力和理解能力,并能将所学知识构成一定的知识网络,难度适中.